EMSA 主要基于蛋白-探针复合物在在凝胶电泳过程中迁移较慢的原理。根据实验设计特异性和非特异性探针,当核酸探针与样本蛋白混合孵育时,样本中可以与核酸探针结合的蛋白质与探针形成蛋白-探针复合物;这种复合物由于分子量大,在进行聚丙烯酰胺凝胶电泳时迁移较慢,而没有结合蛋白的探针则较快;孵育的样本在进行聚丙烯酰胺凝胶电泳并转膜后,蛋白-探针复合物会在膜靠前的位置形成一条带,说明有蛋白与目标探针有互作。
抗体保存得当与否,直接决定了抗体的活性和使用效果!如果抗体保存得当,大部分抗体活性都可以维持数月甚至数年。以abcam 抗体保存方法为主,同样也可以应用到其他绝大部分的抗体产品!
电泳过程至关重要,稍有不慎我们就只能对着 「微笑线」和 「皱眉线」 叹气,而质量好的电泳能让目的条带整齐,结果图让人眼前一亮。电泳的支持介质为聚丙烯酰胺凝胶,该凝胶的聚合则由丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺单体在自由基的催化下完成。
细胞爬片是一种将细胞培养在玻璃或塑料表面上,使其附着并扩展的技术。这种技术可以用于观察细胞形态、细胞运动、细胞-细胞相互作用等。我们在做免疫荧光(IF),激光共聚焦(Confocal),凋亡检测(TUNEL)时,免不了要制备细胞爬片,爬片质量完全决定了最后拍照的质量以及实验数据的精准性。